Université Pierre et Marie Curie

Génétique

Introduction
Génes et génomes
Préparation de l’ADN à cloner
Les vecteurs
Ligation
Banque d’ADN génomique
Utilisation des fragments clonés
Les gènes
L’analyse des génomes
Recherche de gènes
Polymorphisme
Mutagenèse
Analyse fonctionnelle
Cartographie
Biodiversite, évolution
Applications
Glossaire
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L’analyse des génomes

 

 

Différents types d'ADN

Une des propriétés des gènes codant pour des protéines (aussi bien chez des procaryotes que des eucaryotes) est d'être "unique" (peut-être pas exactement unique mais rarement représentée dans le génome complet ) contrairement aux gènes qui codent pour des ARN divers et au reste du génome qui contient des séquences répétées. Cette particularité est utilisée pour les repérer dans un ensemble de clones constituant une banque.

Comme on sait transférer de l'ADN d'un gel sur une membrane de nylon, on sait transférer l'ADN des clones de la banque sur ce même type de membrane. Cette membrane va être hybridée avec de l'ADN génomique digéré par un enzyme de restriction et marqué par "nick-translation" (figure 2-40).

Les clones qui contiennent de l'ADN répété n'auront aucun mal à trouver dans l'ADN génomique digéré des fragments qui leur soit complémentaires. Ils donneront un signal fort à l'autoradiographie. Les clones qui ne contiennent que de l'ADN unique auront beaucoup de mal à trouver un brin complémentaire et le signal, s'il y en a un, ne sera pas détectable (figure 2-41).

Une banque est constituée d'un grand nombre de clones (tableau 2-9). Elle sera donc constituée de nombreuses boites qui seront répliquées sur de nombreuses membranes que l'on traite par lots successifs. Il n'est d'ailleurs pas toujours nécessaire de tous les traiter. On s'arrête lorsque l'on a trouvé ce que l'on cherchait.

pic019.jpg

Figure 2-41. Marquage d'ADN génomique par nick translation .

pic020.jpg

Figure 2-41. Hybridation sur colonies.

 

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